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Revista Ingeniantes 2019 Año 6 No.2 Vol. 2
Ensayo de actividad enzimática de peroxidasas. (a) Coleoptilo sano (b) Coleoptilo infectado
El ensayo se basó en la capacidad que tienen las pe-
roxidasas de utilizar al DTT como donador de electro- Figura 3. Coleoptilos de maíz sanos e infectados con Aspergi-
nes y poder reducir hidroperóxidos, utilizando la técnica
reportada por [13] con algunas modificaciones. Se inició llus parasiticus.
el ensayo con una mezcla de pre incubación a 37 °C
durante 10 minutos que contenía en un volumen de 600 Cuantificación de proteínas totales.
µl, 50 µM de tris-HCl pH 8.0, 4 mM de DTT y 200 µg Se realizó la cuantificación de proteínas totales de las
de extracto de proteínas de cada muestra (coleopti- muestras de maíz (Tabla 2). Las muestras 1, 2 y 4 dis-
lo y raíz). Posteriormente se añadieron 600 µl de una minuyen su concentración de proteínas totales en co-
solución de 100 µM de H2O2 y se incubó la reacción 10 leoptilos infectados, a diferencia de las muestras sanas
minutos a 37 °C. El precipitado de proteínas se eliminó y sin presencia del hongo.
mediante centrifugación de 3 minutos a 500 rpm y se
añadió a la reacción 400 µl de sulfato ferroso amóni- TaTbalbala2. 2C.onCcoenntcreacnitórnacdieónprodteeínparsottoetíanlaess etnotcaolleesopetinlos
co 10 mM y 200 µl de tiocianato de potasio 2.5 M, los decomleaoízp. tilos de maíz.
cuales reaccionan con el hidroperóxido remanente y
forman un complejo color púrpura. La concentración Concentración de proteínas mg/ml
de peróxido se determinó espectrofotométricamente a
480 nm en un equipo SPECTRONIC 20D utilizando una Muestra Sano Infectado
curva estándar de H2O2.
RESULTADOS 1 5.23 5.06
Aspergillus parasiticus.
A. parasiticus en medio PDA de 7 días de incubación a 2 6.08 4.50
28 ± 2°C, tuvo un crecimiento abundante, de color ver-
de obscuro y de tipo algodonoso [12] (Figura 2). 3 4.64 5.48
Figura 2. Crecimiento de Aspergillus parasiticus en medio PDA 4 4.69 2.44
de 7 días de incubación a 28 ± 2°C.
5 4.88 5.17
Obtención de las muestras de coleoptilo y raíz.
Los coleoptilos de maíz de 7 días de incubación a 28 En los resultados de la cuantificación de proteínas to-
± 2°C en las muestras sin hongo, presentaron un creci- tales en raíces de maíz (Tabla 3), las muestras 1, 2 y
miento regular, con coleoptilos de color amarillo y en 4 presentaron menor concentración de proteínas en
algunas partes hialinos (Figura 3a). En las muestras in- raíces en presencia de Aspergillus, a diferencia de las
fectadas con A. parasiticus, el crecimiento fue menor, muestras 3 y 5, teniendo el mismo comportamiento que
además de que presentaron partes enfermas de color las muestras de coleoptilo de maíz, donde estas mis-
café a negro y crecimiento del hongo sobre los granos mas muestras disminuyeron su concentración de pro-
de maíz (Figura 4b). teínas en presencia del hongo.
TTabalbala3. 3C.oCncoennctreanctiórancdióenprdoeteípnaros tteoítnaaless teontarlaeíscesende
mraaíízc.es de maíz.
Concentración de proteínas mg/ml
Muestra Sano Infectado
1 4.79 4.39
2 4.00 3.20
3 4.96 5.50
4 4.26 3.12
5 3.98 4.43
Actividad peroxidasa en coleoptilos y raíces de
maíz.
Se analizó la capacidad destoxificadora de los extrac-
tos de proteínas de coleoptilo y de raíz de maíz hacia
el H2O2. En cuanto a la actividad enzimática en coleóp-
tilos de maíz, tres de las cinco muestras presentaron
mayor actividad peroxidasa en coleoptilos de maíz in-
fectados con A. parasiticus, las cuales fueron las mues-
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