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Revista Ingeniantes 2021 Año 8 No. 2 Vol. 1
vaso de precipitado se filtró a vacío a través de papel
filtro. El producto líquido se descartó. El producto sóli-
do (0.9 g. Xilanas de Agave Succiniladas) se lavó con
etanol y se secó en un horno a vacío. La muestra se
etiquetó como AX-S.
Conjugación con tiramina. La conjugación se realizó
siguiendo el protocolo de Kuzmenko y colaboradores
[14]: 500 mg de AX-S se colocaron en un matraz bola
de 50 mL y se le agregaron 20 mL de agua desionizada
(DI). El matraz de reacción se tapó y se agitó magnéti-
camente por 30 minutos. Se añadieron 87 mg de EDAC
y 63 mg de NHS, el sistema se acondicionó para que la
reacción se llevara a cabo en atmósfera de nitrógeno.
Se preparó una solución de 63 mg de tiramina en 6
mL de DMF y se añadieron gota a gota, la reacción se
dejó en atmósfera de N2 a temperatura ambiente y en
agitación por un periodo de 3 días. El contenido de la
reacción se agregó gota a gota en un vaso de precipi-
tado con 90 mL de etanol frío (-15°C). El contenido del
vaso de precipitado se filtró a vacío a través de papel
filtro. El producto líquido se descartó. El producto sólido
(460 mg de AX-S tiraminizadas) se lavó con etanol y se
secaron en un horno a vacío. La muestra se etiquetó
como AX-TA.
Formación de hidrogeles con nanopartículas de pla-
ta. La elaboración de los hidrogeles se llevó a cabo
siguiendo la metodología reportada por (14): 25 mg de
muestra del conjugado AX-TA se disolvieron en 350
µL de H2O DI, se le adicionó 48 µL de solución de HRP
en agua (600 µg/mL), se agitó por 1 min a 2500 rpm
en un equipo vortex y posteriormente se le agregó 52
µL de H2O2 al 0.3%. El gel se formó inmediatamente
al agregar el peróxido. Otras muestras se prepararon
disolviendo 25 mg de conjugado AX-TA con 400 µL de
soluciones de AgNO3 con concentraciones de 0.125,
1.25 y 12.5 mM para lograr obtener tres concentracio-
nes finales de 0.1, 1.0 y 10.0 mM de AgNO3 respectiva-
mente. Todos los procedimientos de formación de hi-
drogeles se llevaron a cabo dentro de tubos eppendorf
a temperatura ambiente, obteniendo un volumen final
del hidrogel de 500 µL.
Pruebas antibacterianas. El efecto antibacterial de los
hidrogeles de xilanas de agave cargados con AgNPs
en distintas concentraciones fue evaluado mediante el
método de Kirby-Bauer cuantificando el diámetro del
halo de inhibición formado por las muestras de AX-TA
y AgNPs. Primeramente, se procedió a ajustar las unida-
des formadoras de colonias (UFC) a 0.5 según la escala
de McFarland (1.5x108 UFC) en tubos con medio de cul-
tivo Müller-Hinton. Posteriormente se cortaron discos
de 5 mm de diámetro por 2 mm de grosor de cada
uno de los hidrogeles cargados con AgNPs en distintas
concentraciones, así como también hidrogeles solo de
AX-TA como referente control, y se colocaron sobre
cajas Petri con agar y se colocaron en incubación a 37°
C durante 24 h. El diámetro resultante de cualquier zona
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de inhibición (mm) fue medido. También se evaluaron
discos impregnados con antibiótico SXT (sulfametoxa-
zol/trimetoprima, 235 mg/mL) como control positivo.
Todos los experimentos se realizaron por triplicado en
condiciones con ambiente estéril.
RESULTADOS
Caracterización del bagazo de agave. En la Tabla 1
se muestran los resultados obtenidos en la caracteri-
zación del bagazo de agave. Es de destacarse que la
fracción correspondiente a hemicelulosas, que repre-
sentan el 18.6% en peso con respecto al bagazo de
agave seco, está formada por pentosanos.
Tabla 1. Caracterización química de bagazo de agave
Tabla 1. Caracterización química de bagazo de agave
Componente % en peso
Cenizas 3.3±0.2
Extraíbles en acetona 4.2±1.1
Extraíbles en agua caliente 4.2±0.8
Lignina 21.5±2.4
Holocelulosa (celulosa+hemicelulosas)* 66.8±0.6
Celulosa 48.2±2.8
Hemicelulosas 18.6±2.8
Pentosanos 18.7±0.5
NNootat:ato:dtoosdloos sporlcoesntapjeos recstáenndtaadjoessconersestápenctodaal dpeososdcelobangarzeo sdepaegacvteoseacol. pEleposrocendtaejel
bdeahgemaizceoluldoseasasegoabvtuevospoercdiofe.reEncliapeontrrce heonlotcaejluelosdaey cheleulmosaicelulosas se obtuvo
por diferencia entre holocelulosa y celulosa.
Análisis de infrarrojo. En la gráfica de la Figura 1 se
muestran los espectros obtenidos mediante espec-
troscopía de FT-IR para las xilanas de agave (AX) sin
modicar y modificadas. El espectro indicado con la lí-
nea negra corresponde a la muestra AX (xilana de aga-
ve sin modificar). Se observa su huella característica
en los 1041 cm-1 además de la banda en 895 cm-1 ca-
racterística del enlace β-(1→4) [19, 20]. Por otro lado, en
el espectro de la muestra AX-S (línea azul) se observa
una banda en los 1735 cm-1 correspondiente a grupos
carboxilos introducidos en las cadenas de las xilanas
luego del proceso de succinilación. El espectro del ma-
terial conjugado (AX-TA) se aprecia en la línea color
rojo, donde se indica una banda en los 1518 cm-1 resul-
tado de la conjugación con la tiramina. Estos resultados
validan la eficiencia de la metodología para la realiza-
ción de los procesos de purificación, funcionalización y
conjugación de las xilanas de agave.
Figura 1.- Espectros FT-IR de las xilanas de agave. AX purifi-
cado (línea negra). AX-S succinilado (línea azul). AX-TA conju-
gado (línea roja).